近日，北京大学李毓龙教授团队连发两篇高分文章！
2023年11月17日，在Science上在线发表题为“A tool kit of highly selective and sensitive genetically encoded neuropeptide sensors”的研究论文，报道了一种通过在神经肽受体中嫁接由荧光报告模块和部分第三胞内环（Intracelllular loop 3, ICL3）形成嵌合体的探针开发策略，高效可通用地开发了一系列神经肽荧光探针工具包。由此策略开发而出的SST和CRF探针可以实现在细胞、组织和小鼠在体脑成像中以高灵敏度、高特异性对神经肽的浓度变化进行实时监测。
2023年12月1日，又在Nature Methods杂志在线发表了题为“Improved green and red GRAB sensors for monitoring dopaminergic activity in vivo”的研究论文，成功开发了第三代的红绿双色多巴胺探针工具包，并通过在体红绿双色成像等方式证明全新一代多巴胺探针在多脑区、多行为范式下均能灵敏特异地检测多巴胺及其它信号分子的时空动态释放。
维真生物有幸为上述两篇文章的研究提供AAV病毒产品！
维真生物可提供多种神经递质现货探针(GRAB sensors)，包括：乙酰胆碱Ach、多巴胺DA、去甲肾上腺素NE、五羟色胺5HT、组胺HA、腺苷Ado、腺苷三磷酸ATP、血管活性肠肽VIP、胆囊收缩素CCK、促肾上腺皮质激素释放激素CRF、精氨酸血管加压素AVP、催产素OXT、生长激素抑制素SST、神经降压肽NTS、内源大麻素eCBs、大麻素AEA和褪黑素MT……
文章1
A tool kit of highly selective and sensitive genetically encoded neuropeptide sensors
李毓龙团队利用基于G蛋白偶联受体激活的探针开发策略先后开发了针对胆碱类、单胺类、嘌呤类和脂类神经递质/调质的荧光探针。在此项研究中，研究人员将含有荧光报告模块的ICL3从一种现有的神经递质探针中移植到神经肽的GPCR中。由此形成的新型嵌合体蛋白在与神经肽结合后可以发生荧光变化，从而报告神经肽浓度的动态变化。利用这种策略，研究人员开发了一系列神经肽的荧光探针，包括生长抑素（somatostatin, SST）、促肾上腺皮质激素释放因子（corticotropin-releasing factor, CRF）、胆囊收缩素（cholecystokinin, CCK）、神经肽Y（neuropeptide Y, NPY）、神经紧张素（neurotensin, NTS）和血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide, VIP）。
图1：基于通用型ICL3移植策略开发神经肽类GRAB探针
文章展示了一系列应用成果，证明GRAB SST1.0和CRF1.0探针能够以高灵敏度、特异性和时空分辨率在体外和体内监测神经肽的动态变化。这种灵活的探针开发策略和利用此策略开发出的多种神经肽荧光探针为研究神经肽在生理和病理状态下的释放、调控和功能提供了重要工具。
维真助力：AAV病毒
滴度达3×1013- 5×1013 vg/ml
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病毒产品 |
实验动物 |
注射部位及病毒用量 |
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AAV9-hSyn-CRF1.0 , AAV9-hSyn-CCK1.0, AAV9-hSyn-EGFP-CAAX, AAV9- CMV-saCAS9-sgRNA |
6-8周龄雄性C57BL/6N 小鼠 |
left CeA， left CA1. 300 nl |
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AAV9-hSyn-CRF1.0, AAV9-hSyn-CRFmut, AAV9-hSyn-EGFP-CAAX |
6-8周龄雌性C57BL/6N 小鼠 |
motor cortex， PFC. 200 nl |
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AAV-hSyn-CRF1.0 AAV-hSyn-CRFmut |
10-12周龄雄性 C57BL/6N小鼠 |
PVN. 160 nl |
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AAV9-hSyn-CRF1.0， AAV9-hSyn-EGFP-CAAX |
10-12周龄雄性 C57BL/6N 小鼠 |
PVN. 300 nl |
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AAV9-hSyn-SST1.0 |
8-13周龄雄性成年C57BL/6J 小鼠 |
BLA. 300 nl |
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AAV9-hSyn-CRF1.0, AAV9-hSyn-SST1.0, AAV9-hSyn-mApple-CAAX AAV9-hSyn-EGFP-CAAX |
6-8周龄雄性C57BL/6N 小鼠 |
Motor cortex. 300 nl |
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AAV9-hSyn-SST1.0, AAV9-hSyn-CRF1.0, AAV9-hSyn-EYFP |
6-8周龄雄性C57BL/6N 小鼠 |
mPFC. 300 nl |
文章2
Improved green and red GRAB sensors for monitoring dopaminergic activity in vivo
在本研究中，研究人员基于文章1报道的荧光报告模块嫁接策略，将含有荧光报告基团模块的ICL3从现有的神经递质探针中移植到多种不同物种的多巴胺受体中，从而开发出了一系列全新一代多巴胺探针，包括绿色第三代多巴胺探针gDA3m, gDA3h及红色第二代多巴胺探针rDA2m, rDA2h, rDA3m和rDA3h。
图2：新一代双色多巴胺探针的开发和细胞刻画
此研究利用新型ICL3嫁接策略，成功构建了全新一代的红绿双色多巴胺探针工具包。与已发表的多巴胺探针相比，全新一代多巴胺双色探针具有更高的反应幅度、更好的灵敏度和更特异的选择性，使得在体双色光纤记录多种神经递质分子在多个脑区不同行为下的动态变化及皮层双光子成像成为可能。因此，此研究开发的全新一代多巴胺探针弥补了现有多巴胺探针的短板，对于中枢神经系统不同脑区的多巴胺都能实现灵敏、特异的检测，为进一步深入研究多巴胺系统在生理和病理条件下的作用和分子机理提供了更为强大的工具。
维真助力：AAV病毒
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病毒产品 |
病毒滴度 |
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AAV2/9-hSyn-gDA3m |
2.8×1013 vg/ml |
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AAV2/9-hSyn-gDA3h |
8.43×1013 vg/ml |
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AAV2/9-hSyn-gDA3mut |
6.21×1013 vg/ml |
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AAV2/9-hSyn-gDA2m |
5.72×1013 vg/ml |
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AAV2/9-hSyn-dLight1.3b |
6.49×1013 vg/ml |
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AAV2/9-DIO-hSyn-gDA3m |
6.2×1013 vg/ml |
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AAV2/9-EGFP-CAAX |
3.5×1013vg/ml |
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AAV2/9-hSyn-ACh3.0 |
8.0×1013 vg/ml |
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AAV2/9-hSyn-eCB2.0 |
9.2×1013 vg/ml |
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AAV2/9-hSyn-G-Flamp1 |
7.29×1013vg/ml |
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AAV2/9-hSyn-NE2m |
1.39×1013vg/ml |
*文中部分内容来源于“北大生科”，如有侵权请联系删除。
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